熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 線頸*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nematodirus filicollis | 貨號 | YSP96999 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
phospho-beta 2 Adrenergic Receptor (Ser355 + Ser356) 英文名稱： 酸化能受體β2/β2-AR抗體 0.1ml Anti-CBX3/FITC 熒光素標記染色盒同源物3抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml 6-keto-PGF1a(Mouse 6-keto-prostaglandin F1a) ELISA Kit 小鼠6酮前列腺素F1aMulti-class antibodies規格： 48T Anti-CCL3/MIP-1 Alpha/FITC 熒光素標記巨噬細胞炎性蛋白1α抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml Rhesus antibody Rh EGF 小鼠抗表皮生長因子抗體 規格 0.1ml LZM (Rabbit Lysozyme) ELISA Kit 兔溶菌酶 96T MRCK alpha 英文名稱： CDC42結合蛋白激酶α抗體(MRCKα) 0.2ml C17orf64 英文名稱： 17號染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml Anti-OPN 骨橋蛋白抗體(分泌型蛋白1)Multi-class antibodies規格： 0.1ml MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質金屬蛋白酶1Multi-class antibodies規格： 48T 名稱：Human Peptide γ,Pγ ELISA Kit進口/原裝
人ω干擾素(IFN-ω/IFNB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Interferon ω,IFN-ω ELISA Kit進口/原裝
犬瘟熱病毒PCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存50T
犬鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存50T
犬布氏桿菌PCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存50T
醛縮酶測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存24 T
醛縮酶Aldolase 4℃保存100mg
醛基磁珠Magnetic beads,Aldehydic 4℃密閉、豎直保存2mL
去離子甲酰胺Deionized Formamide4℃保存100mL
去垢劑去除樹脂Detergent Erasol Resin常溫保存10mL
曲拉通 X-114Triton?Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies規格： 0.1ml Rhesus antibody Rh ICAM-3/CD50 細胞間粘附分子-3抗體 規格 0.1ml Cortisol(Mouse Cortisol)ELISA Kit 小鼠皮質醇 96T PCDH18 英文名稱： 原鈣粘附蛋白18抗體 0.2ml 酸化酪氨酸 單克隆抗體Phosphotyrosine Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 腫瘤壞死因子α 單克隆抗體TNF α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 腫瘤壞死因子α 單克隆抗體TNF α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul P53 (Mono Methyl Lys370) 單克隆抗體P53 (Mono Methyl Lys370) Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 信號轉導因子和轉錄激活因子3 單克隆抗體STAT3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 脂酰肌醇3激酶P85α 單克隆抗體PI3 Kinase P85α Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul
線頸*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒CSMD2蛋白抗體TSLP/FITC 熒光素標記淋巴細胞生成素-1抗體IgG100 ul CSMD3蛋白抗體TSLPR/CRLF2/FITC 熒光素標記兔抗、大、胸腺基質淋巴細胞生成素受體抗體IgG100 ul 鈣調神經酸酶CSTP1抗體TSP-1/THBS1/FITC 熒光素標記血小板反應蛋白/凝血酶敏感蛋白1抗體IgG100 ul CTAGE6蛋白抗體TTF-1/FITC 熒光素標記甲狀腺核轉錄因子-1/甲狀腺特異增強子結合蛋白抗體IgG500 ul 皮膚T細胞淋巴瘤相關抗原4抗體TTF-2/FITC 熒光素標記甲狀腺轉錄因子-2抗體IgG100 ul 膜蛋白CLDND2抗體Tubb3/FITC 熒光素標記β微管蛋白-Ⅲ抗體IgG20 ul 含半胱氨酸和組氨酸豐富域蛋白1抗體Tubulin- Alpha/FITC 熒光素標記微管蛋白α抗體IgG100 ul 豬圓環病毒Ⅱ型衣殼蛋白Tubulin- Beta/FITC 熒光素標記微管蛋白抗體IgG100 ul 抗菌肽CAMP抗體Tubulin- Beta/FITC 熒光素標記微管蛋白抗體IgG100 ul |
點擊放大