PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
抑霉唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)mTOR AntibodyN-叔丁氧羰基-N'-芐氧羰基-D-鳥氨酸

吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1mg/ml,溶劑：甲)Phospho-CD79A (Tyr182) (D1B9) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)己基噻吩

稻瘟靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)Phospho-mTOR (Ser2481) Antibody氯鉑酸

甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5%)Phospho-mTOR (Ser2481) Antibody芐氧基溴芐

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5～3%,酮)Phospho-mTOR (Ser2481) AntibodyN-芐基吡咯烷-甲酸甲酯

殺螟硫(標(biāo)準(zhǔn)品)Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(S)-異基-2-唑烷酮

鄰二甲酸二甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-mTOR (Ser2448) (49F9) Rabbit mAb (IHC Specific)丁烷四羧

對(duì)二氯(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99.8%(GC))Phospho-mTOR (Ser2448) (49F9) Rabbit mAb (IHC Specific)雙酮-D-甘露糖

對(duì)二氯標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.102mg/ml,基體：異辛烷)NOS (pan) Antibody六氟酸

1,二氯-d4(98% D, 98% (CP))Cyclin D1 (92G2) Rabbit mAb硫酸鈰

間二氯(標(biāo)準(zhǔn)品)Cyclin D1 (92G2) Rabbit mAb間甲氧基甲酰氯

二溴氯烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Serine Racemase (D5V9Z) Rabbit mAb溴甲酰氯

2,二硝基氯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)Phospho-SRC-3 (Thr24) Antibody基甲酰氯

甲基毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=6～4%,酮)Caldesmon-1 Antibody2-氟-5-吡啶

矮壯素(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-(Ser) Arg-X-Tyr/Phe-X-pSer Motif Antibody酸頻哪酯

菌靈(標(biāo)準(zhǔn)品)iNOS Antibody (Mouse Specific)1-溴芘

蕓苔素內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)mTOR (7C10) Rabbit mAb羥基環(huán)己烷甲酸乙酯

因標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,基體:酮)mTOR (7C10) Rabbit mAb枸櫞酸非
節(jié)狀古柏線蟲探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒PACAP R1/VIP receptor-I  腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-I抗體100 ul

綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒PACAP-27/38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體100 ul

綿羊白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒PACAP-38  腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體20 ul

綿羊白介素13(IL-13)ELISA試劑盒PADI4  關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因抗體300 ul

綿羊白介素12(IL-12)ELISA試劑盒PAF  血小板活化因子抗體100 ul

綿羊白介素10(IL-10)ELISA試劑盒PALB2  癌易感基因相關(guān)蛋白2100 ul

綿羊白蛋白(Albumin)ELISA試劑盒PAFAH2/Lp-PLA2  脂蛋白脂酶A2抗體1Kit

綿羊γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒PAFR/PTAFR  血小板活化因子受體抗體100 ul

綿羊C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒PAK1  p21激活激酶1抗體100 ul