賈第蟲通用PCR檢測試劑盒說明書

服務流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。

實驗外包:
1.基因組學：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉錄組學：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質組學：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質檢測：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學：GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型：原代細胞、細胞模型、動物模型構建

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特點優勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：產品僅用于科研檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
     5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 產品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線。
二硫化鉬/硫化鉬/輝鉬礦/Molybdenum disulfide 質量規格：分析標準品,≥99.8%(GC) 包裝;1g

氫氧化鋯/偏鋯酸/Zirconium hydroxide 質量規格：分析標準品 包裝;5g

氧化鋯/二氧化鋯/鋯酸酐/顏料白16/氧化鋯(Ⅳ)/Zirconium dioxide 質量規格：分析標準品 包裝;25g

氧氯化鋯/二氯氧化鋯/氯氧化鋯/次氯酸鋯/八氯化鋯酰/堿式氯化鋯/氧氯化鋯八合物/氯化氧化鋯(Ⅳ)八合物/Zirconyl chloride octahydrate 質量規格：分析標準品,>99.5%(GC) 包裝;5g

硫酸鋯/硫酸鋯四合物/硫酸鋯(IV)四合物/Zirconium sulfate tetrahydrate 質量規格：分析標準品 包裝;10g

錫粒/錫/Tin 質量規格：分析標準品,>99%(GC) 包裝;50g

錫粉/錫/Tin 質量規格：分析標準品 包裝;1g

錫棒/錫/Tin 質量規格：分析標準品 包裝;25g

錫箔/錫/Tin 質量規格：分析標準品,>99%(GC） 包裝;5g

一氧化錫/氧化亞錫/氧化錫(II)/Tin(II) oxide 質量規格：分析標準品 包裝;25g

二氧化錫/白色氧化錫/錫灰/氧化錫/氧化高錫/Tin(IV) oxide 質量規格：分析標準品,≥99.5%(GC) 包裝;5g

硫酸亞錫/硫酸錫/硫酸亞錫(II)/硫酸錫(II)/Tin(II) sulfate 質量規格：分析標準品 包裝;1g

草酸亞錫/乙二酸亞錫/乙二酸亞錫(II)鹽/草酸錫/草酸錫(II)/Tin(II) oxalate 質量規格：分析標準品,≥98.5%(GC) 包裝;25g

鎢粉/鎢/Tungsten 質量規格：分析標準品 包裝;5g

碳化鎢/一碳化鎢/碳化鎢粉/炭化鎢/Tungsten carbide 質量規格：分析標準品,≥98.0%(HPLC) 包裝;100g

三氧化鎢/氧化鎢/鎢酸酐/氧化鎢(VI)/Tungsten(VI)oxide 質量規格：分析標準品,99.8%（GC) 包裝;25g

氟化鈰/三氟化鈰/氟化亞鈰/氟化鈰(Ⅲ)/Cerium(III) fluoride 質量規格：分析標準品,用于環境分析,>99.0%(GC) 包裝;5g
賈第蟲通用PCR檢測試劑盒說明書Erythrobacter│sp. 中文名稱：赤桿菌種屬:Erythrobacter│sp.分離基物:沉積物/TVMC沉積物(25-30cm)提供形式:斜面培養物安全等級:1模式菌株:no應用領域:南大西洋細菌培養方法培養基:471生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：≥98%

Novosphingobium│soli 中文名稱：土壤新鞘脂菌種屬:Novosphingobium│soli分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養方法培養基:821生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Sphingobium│lactosutens 中文名稱：鞘氨醇菌(加詞待譯)種屬:Sphingobium│lactosutens分離基物:沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物/TVMC沉積物(6-10cm)提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養方法培養基:821生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%

Parvibaculum│lavamentivorans 中文名稱：食清潔劑細小棒菌種屬:Parvibaculum│lavamentivorans分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自石油富集菌群培養方法培養基:821生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：≥97%

Roseovarius│tolerans 中文名稱：抗逆玫瑰變色菌種屬:Roseovarius│tolerans分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:大洋細菌培養方法培養基:821生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：≥97%

Sneathiella│sp. 中文名稱：斯尼斯氏菌種屬:Sneathiella│sp.分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:大洋細菌培養方法培養基:471生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：average Mw ~800,average Mn ~600

Jannaschia│sp. 中文名稱：簡納西氏菌種屬:Jannaschia│sp.分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:大洋細菌培養方法培養基:821生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：99%

Perlucidibaca│sp. 中文名稱：透明球菌種屬:Perlucidibaca│sp.分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物模式菌株:no應用領域:大洋細菌培養方法培養基:821生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法 純度：98%