熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 鸚鵡喙羽病病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Beak and Feather Disease Virus（BFDV） | 貨號 | YSP96432 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
無水酸氫二鈉(分子生物學級)SMARCA1 (D4Q7V) Rabbit mAb[(甲基氨基)甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯 菲啰,菲洛SirT6 (D8D12) Rabbit mAb6,7-二甲氧基喹唑啉-酮 乙酸鈉三水(分子生物學級)DAP12 (D7G1X) Rabbit mAb2,二溴-5-氯吡啶 脫葉靈,噻隆CENP-T Antibody1-甲酰哌 (AR)PRMT4/CARM1 (3H2) Mouse mAb氯-氟酸 乙脫氫酶eIF1 (D7G3L) Rabbit mAb溴吡唑-甲酸 吐溫80(化學純)OS-9 (D8P4G) Rabbit mAb2,5-二溴對二甲酸 吐溫80(藥用級)Tris Buffered Saline (TBS-10X)2,6-二溴萘 吐溫80(細胞培養級)Caldesmon-1 (D5C8D) XP® Rabbit mAb1,6-二羥基萘 亞鐵(AR)Caldesmon-1 (D5C8D) XP® Rabbit mAb1-羥基-1H-1,2,三唑-羧酸乙酯 葡萄糖酸(AR)Caveolin-1 (D46G3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)5-甲基喹喔林 PF-562271IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)5-甲基-2-噻吩甲 海藻酸鈉Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAb(R)-氟吡咯烷(HCL) 酸鈉Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAb2,7-二溴咔唑 膠原酶I型(sigma)PN Blocking Peptide3,5-二氯吡啶-甲 膠原酶II型(sigma)FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,二氟磺酰 膠原酶IV型(sigma)LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,二甲基芐基氯 鉬酸鈉二水(AR)SignalSilence® BRCA1 siRNA I硫代酰乙酯
鸚鵡喙羽病病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒豚鼠白介素8(IL-8)ELISA試劑盒phospho-EGFR(Tyr1068) 酸化表皮生長因子受體抗體100 ul 豚鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒EGF 表皮生長因子抗體100 ul 豚鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒VEGFR3 表皮生長因子受體3抗體1 Kit 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒EGF 表皮生長因子抗體（）100 ul 豚鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒EGFL7 類表皮生長因子域7抗體100 ul 豚鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒EGFR 表皮生長因子受體抗體100 ul 豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒EF1 Alpha 延伸因子EF-1a抗體100 ul 豚鼠白介素1β(IL1B)ELISA試劑盒EGFRvIII 表皮生長因子受體III型突變體抗體100 ul 豚鼠白介素18(IL-18)ELISA試劑盒Egr-1 早期生長應答蛋白1抗體1 Kit |
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