牛皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒

樣品RNA的抽提：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
基-2-乙酰氨基-2-脫氧-b-D-葡萄糖苷(>99%,BC)Phospho-4E-BP1 (Thr70) (D7F6I) Rabbit mAb十二烷基

-Α-L-吡喃海藻糖苷(>98%,BC)Phospho-p90RSK (Ser380) (D5D8) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-3,3,三氟

基-beta-D-葡萄糖酸苷(>98%,BC)KHSRP (E2E2U) Rabbit mAb1-溴-氟-5-

肼(>98%,BC)Nogo-A Antibody2,8-二氯喹啉-甲

酮(>98%,BR)CD9 (D3H4P) Rabbit mAb紫蘇

無毒型核酸染色劑Phospho-Rad17 (Ser635) (D6K9P) Rabbit mAb1H-吲唑-6-羧酸

5,5-二甲基-1,環己二酮Enolase-1 (D2S1A) Rabbit mAbN,N'-二(2-氨乙基)-1,二

5-氟胞苷(>98%,BR)GATA-3 (D13C9) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2-氨甲基-(氟芐基)嗎啉

駢三氮唑(>98%,BR)SimpleChIP® Human NR1D1 Promor Primers5-二并環庚酮

5-甲基吲哚(>98%,BR)Munc18-1 (D4O6V) Rabbit mAb1-氯-2-三氟甲氧基

5-硝基愈創木酚(植物激素級)CNOT6 (E1L8F) Rabbit mAb二(乙酰酮基)鈦酸二異酯

6-溴-2-萘酚(>98%,BR)PTMScan® Acetyl-Lysine Motif [Ac-K] Kit9,9-二甲基氧雜蒽

6-(γ,γ-二甲基基氨基)嘌呤核苷(植物激素級)Rev-Erbα (E1Y6D) Rabbit mAb(S)-N-芐氧羰基-氨基-基-1-

6-甲基(>98%，BR)E-Tag Antibody2-甲基吡咯烷

7-氨基頭孢烷酸SSRP1 (E1Y8D) Rabbit mAb1-BOC-羥甲基哌

8-羥基喹哪啶(>98%,BR)Choline Kinase α (D5X9W) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯

9,10-二溴蒽(>98%,BR)PHGDH Antibody甲酰基吲哚酸-1-羧酸 T-丁基酯

雙酚芴(>98%,BR)Focal Adhesion Proin Antibody Sampler Kit3，5-吡唑二甲酸
牛皰疹病毒通用探針法熒光PCR檢測試劑盒骨橋素(OPN)ELISA試劑盒GFR Alpha-1  GDNF家族受體α-1抗體100 ul

骨膜蛋白/成骨細胞特異性因子2(POSTN)ELISA試劑盒GHR  生長激素受體抗體100 ul

骨膠原交聯(Cr)ELISA試劑盒Ghrelin  腦腸肽抗體20 ul

骨性酸酶(BALP)ELISA試劑盒GHRF/GHRH  生長激素釋放激素抗體100 ul

骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒ID1  DNA結合抑制因子1抗體100 ul

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA試劑盒GIG8/ID2  DNA結合抑制因子2抗體500 ul

骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA試劑盒GIP  胃泌素抑制肽抗體100 ul

骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒TNFRSF18  糖皮質激素誘導腫瘤壞死因子受體抗體100 ul

骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒Glasses Snake poison Proin  兔抗眼鏡蛇蛇毒蛋白抗體（眼鏡蛇）100 ul