實驗通用規則：

1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。

4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。

7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。

8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。

儀器：

1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3、臺式離心機

4、漩渦混勻器

5、微量移液器

樣本收集與前處理：

血清（漿）可直接測定。

紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。

動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。

培養細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質破碎后離心取上清測定。

具體的樣本前處理：參考我們隨貨發送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時不能產生氣泡

2.溫

1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應疊在一起。

3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。

2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。

3-(三氟氧)  98%兔超氧化物歧化酶1,可溶(SOD1)免疫試劑盒周期素依賴性激酶7抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Cy5  Cy5標記的兔抗猴IgG

2-(三氟氧) 97%兔超氧化物歧化酶[Mn],線粒體(SOD2)免疫試劑盒周期素依賴性激酶8抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Cy3  Cy3標記的兔抗猴IgG

2,4,5-三溴咪唑 98%兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)免疫試劑盒周期蛋白依賴激酶抑制因子1C抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Bio  生物素標記的兔抗猴IgG

3,4,5-三氟 97%兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)免疫試劑盒Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/APC  APC標記的兔抗猴IgG

2,3,4-氧 98%兔補體片斷5a(C5a)免疫試劑盒c-fos抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/AP  堿性酶（AP）標記的兔抗猴IgG

2- 98%兔補體蛋白3(C3)免疫試劑盒嗜鉻粒素A抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgG

3- 97%兔二(MDA)免疫試劑盒CGRP降鈣素因相關肽抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的兔抗猴IgG

3,4,5-氧 97%兔半胱氨蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)免疫試劑盒ChAT膽堿乙酰轉移酶抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗猴IgG

間三氟 97%兔白介素7(IL7)免疫試劑盒周期蛋白N端結構域蛋白2抗體Rabbit Anti-Monkey IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗猴IgG

3-乙烯 96%兔白介素-5(IL-5)免疫試劑盒肌動蛋白結合蛋白CORO1A抗體Rabbit anti-Monkey IgG whole serum  兔抗猴IgG抗血清

4-乙烯 96%兔白介素17(IL-17)免疫試劑盒抗菌肽/天蠶素抗體Rabbit Anti-Monkey IgG  兔抗猴IgG

二 CP，98%(二異構體+乙）兔白介素12(IL-12/P70)免疫試劑盒鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗體Rabbit Anti-MK IgM/PE-Cy7  PE-Cy7標記的兔抗猴IgM

二 AR,99.0%兔白蛋白(Albumin)免疫試劑盒表面趨化因子受體8抗體Rabbit Anti-MK IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的兔抗猴IgM

二 分析標準品兔阿霉素(ADR)免疫試劑盒趨化素樣因子超家族成員2抗體Rabbit Anti-MK IgM/PE  PE標記的兔抗猴IgM

5-氨乙酰鹽鹽 99%兔γ-谷氨酰轉移酶1(GGT1)免疫試劑盒胱硫γ裂解酶抗體Rabbit Anti-MK IgM/Cy7  Cy7標記的兔抗猴IgM
脂氧合酶（LOX）小鼠補體蛋白4浙貝母（標準品）Human, Mouse, Rat

小鼠素鷓鴣菜（標準品）Human

大鼠熱休克蛋白40珍珠（標準品）Human, Mouse

人天門冬氨轉氨酶/谷草轉氨酶珍珠母（標準品）Human, Mouse

大鼠熱休克蛋白20正丁酞;丁酞內酯（標準品）Human

人肝脂酶正二十九烷Human, Mouse

小鼠α2抗纖溶酶芝麻林素（標準品）Human, Mouse

小鼠α2纖溶酶抑制物芝麻素(標準品)Human, Mouse, Rat

人乙酰肝素酶知母（標準品）Human, Mouse, Rat

凋亡調節蛋白δ+γ抗體Jun B/FITC  熒光素標記活化蛋白激酶B抗體IgG

叉頭蛋白O1/O3/O4抗體Jun D/FITC  熒光素標記活化蛋白激酶D抗體IgG