埃希氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒

熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
NHS-biotin;生物素琥珀酰亞酯 Cadherin-6 (D3T3I) Rabbit mAb2,二酚

消旋腎上腺素；DL-腎上腺素AMPKα (D5A2) Rabbit mAb (Biotinylad)BOC-D-絲氨酸甲酯

雷貝拉唑鈉(標準品)Claudin-2 (E1H9O) Rabbit mAb2,5-二羥

雷貝拉唑鈉IκBα (44D4) Rabbit mAb3,二氯甲

頭孢克肟USP18 (D4E7) Rabbit mAb2,5-二

頭孢克肟(標準品)USP18 (D4E7) Rabbit mAb紅色KB/5-氯-2-

咪草煙IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-rminal Antigen)2-氯-5-

O-去甲文拉法辛(R型)IκBα (L35A5) Mouse mAb (Amino-rminal Antigen)2,5-二氯

O-去甲文拉法辛(S型)RANK Ligand (L300) Antibody氯間二酚

奧美沙坦SP Antibody交酯

1,二氨基胍鹽酸鹽 GSK-3α (D80D1) XP® Rabbit mAb美羅培南側(cè)鏈

3,5-二-L-甲狀腺素,3,5-二甲腺原氨酸GABA(B)R2 (C44A4) Rabbit mAb(4R,5S,6S)-[[(3S,5S)-5-[(二甲基氨基)甲酰基-1-[[(硝基芐基)氧]羰基]-吡咯烷基]硫]-6-[(1R)-1-羥乙基]-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環(huán)[3.2.0]庚-2--2-羧酸 硝基芐基酯

短葉松素(標準品)CREB (D76D11) Rabbit mAb美羅培南

環(huán)孢素D Akt (pan) (40D4) Mouse mAb (Biotinylad)甲基酸酯

帕比司他CDC20 Antibody2-氨基-1-丁

HDAC靶點抑制劑Cardiogenesis Marker Antibody Sampler Kit戊酮

鹽酸洛美利PAK2 (3B5) Mouse mAb乙酸甲酯

酯蟾毒配基；蟾力蘇(標準品)MacroH2A1.2 Antibody吡咯烷酮
埃希氏菌屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒ATH III /FITC  熒光素標記抗凝血酶Ⅲ抗體IgG100 ul

鴨β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒ATM/FITC  熒光素標記毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體IgG300 ul

蜥蜴ELISA試劑盒Phospho-PAK4 (Ser99)/FITC  熒光素標記酸化p21激活激酶4抗體IgG100 ul

蜥蜴孕激素/孕酮(PROG)ELISA試劑盒ATP2c1/Ca++ ATPase/FITC  熒光素標記鈣離子ATP酶通道蛋白抗體IgG20 ul

蜥蜴雄二酮(ASD)ELISA試劑盒ATP4B/H+K+ ATPase/FITC  熒光素標記氫鉀ATP酶通道蛋白抗體IgG100 ul

蜥蜴生長激素(GH)ELISA試劑盒ATP5j/FITC  熒光素標記ATP合成酶H+轉(zhuǎn)運線粒體F0復(fù)合體亞基F6抗體IgG100 ul

蜥蜴*狀腺原氨酸(T3)ELISA試劑盒ATP7A/FITC  熒光素標記銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)α鏈抗體IgG20 ul

蜥蜴甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒ATP7B/FITC  熒光素標記銅轉(zhuǎn)運蛋白質(zhì)β鏈抗體IgG100 ul

蜥蜴睪酮(T)ELISA試劑盒phospho-ATP citra lyase(Ser455) /FITC  熒光素標記兔抗、大、三酸腺檸檬酸裂解酶抗體IgG20 ul