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    葡萄糖脫氫酶(GCDH)試劑盒品牌

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    更新日期:
    2022-01-23
    點擊次數:
    1312
    產品特點:
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      葡萄糖脫氫酶(GCDH)試劑盒品牌的詳細資料:

    公司產品僅用于科研測定步驟:

    1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm

    2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水149稀釋。

    3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml0.1ml的比例混勻配制)

    4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

    5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

    產品名稱:葡萄糖脫氫酶(GCDH)試劑盒品牌

    規格:48樣、96樣、

    貨號:GOY-016600

    檢測方法:可見分光光度法、微板法

    產品分類:呼吸代謝途徑系列

    貯存溫度:28℃

    本試劑盒保質期:6個月

    圖片1.png 

    【實驗前溶液配制】

    配液1、將2X濃縮復溶液用去離子水按照1:1稀釋(1 份濃縮復

    溶液+1份去離子水)用于樣本的復溶。

    配液2、將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19

    稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按 所需用量

    配制洗滌液。

    配液3、將30X濃縮樣品提取液用去離子水按照1:29稀釋(1

    濃縮洗滌液+29份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。

    【所用儀器、試劑】

           :微孔板酶標儀450nm/630nm、旋轉蒸發儀/氮氣吹干裝

    置、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g )

    微量移液器:單道 20μl~200μl100μl~1000μl、多道 250μl

               :乙腈、中性氧化鋁


    3.png

     

    選擇抗凝的注意點:

    、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

    、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

    、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.40.5ml血漿);

    、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

    操作步驟:

    實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

    1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

    2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

    3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

    4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

    5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

    6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

    7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

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