熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 諾卡菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nocardia spp. | 貨號 | YSP97013 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 柱枝雙孢霉 1g 晚期糖基化終末產物受體(AGER)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 細極鏈格孢 250mg 載脂蛋白M(APOM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 肉桂鏈霉菌 1g 胰島素樣生長因子結合蛋白7(IGFBP7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 總狀毛霉 5g α白蛋白(AFM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 福山假絲酵母 1g 免疫球蛋白M(IgM)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 玉米黑粉菌 5g 脂肪酸合酶(FASN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 豌豆根瘤菌 1g 脂肪酸合酶(FASN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 根瘤菌 5g 乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 尖角凸臍蠕孢 1g 野鼠色基因相關蛋白(AGRP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 深層大洋芽孢桿菌 5g 激肽釋放酶1(KLK1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 假單胞菌 1g 胰腺再生蛋白Iα(REG1α)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 釀酒酵母 25g 胰腺特異轉錄因子1α(PTF1α)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% *禾谷鐮刀菌 5g 含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥95% (HPLC) 大腸埃希菌 1g 補體因子P(CFP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥95% (HPLC) 羊泰勒蟲（崇信株） 250mg 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 凍干粉 厭氧亞硫酸鹽還原梭菌（定量） 1g 腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 慢生根瘤菌 25g 核心蛋白聚糖(DCN)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 香菇 5g
諾卡菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒細胞表面趨化因子受體3抗體WWOX /FITC 熒光素標記包含氧化還原酶的WW域抗體IgG20 ul 補體C2抗體WIG-1/FITC 熒光素標記野生型p53誘導基因1抗體IgG1 Kit 造血干細胞抗原CD133抗體WIP1/FITC 熒光素標記原癌基因WIP1抗體IgG100 ul 內毒素受體抗體WNK1/FITC 熒光素標記賴氨酸缺陷型蛋白激酶1抗體IgG100 ul CD20抗體WNK3 proin/FITC 熒光素標記絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK3抗體IgG100 ul CD24抗體WNK4/FITC 熒光素標記一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體IgG100 ul 白介素2受體a鏈/IL-2RA抗體Il-7R a(CD127)/RBITC 羅丹明標記白細胞介素-7受體a抗體IgG100 ul B和T淋巴細胞衰減蛋白抗體IL-17/RBITC(Inrleukin-17) 羅丹明標記白細胞介素17抗體IgG100µl CD4抗體HAS/RBITC 紅色羅丹明標記血清白蛋白抗體IgG100 ul |
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