樣品RNA的抽提：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。 產品名稱 | 大腸彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Campylobacter coli | 貨號 | YSP96493 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
氫氧化鈉標準溶液(0.1000mol/L(0.1N))SignalStain® EDTA Unmasking Solution (10X)4,4’-(2,2,2-三氟-1-三氟甲基)亞乙基雙(1,2-二甲酸) 草酸鈉容量分析用溶液標準物質TIGAR (D3F4A) Rabbit mAb5-甲基-4，6-二羥基嘧啶 硝酸銀標準溶液(0.1017mol/L)Kv7.2 (D9L5S) Rabbit mAb2-溴-甲 硝酸銀標準溶液(0.1000mol/L(0.1N))MKL1/MRTF-A Antibody2,6-萘二磺酸鈉 硝酸銀標準溶液(0.01000mol/L(0.01N))PRMT7 (D1K6R) Rabbit mAb六氫鄰二甲酸 百里香酚藍(IND)LARP1 Antibody溴-氯甲 百里香酚藍(ACS reagent,95 %)Vti1a (D8U3M) Rabbit mAb二甘酸 喹哪啶紅Phospho-Mcl-1 (Thr163) (D5M9D) Rabbit mAb甲基紅鈉鹽 酚酞(98%)Noxa (D8L7U) Rabbit mAb2-呋喃甲酰肼 四溴酚藍XPC (D1M5Y) Rabbit mAb5,6-二氯-2-并咪唑 百里香酚酞IFIT1 (D2X9Z) Rabbit mAb2-氨基乙脒鹽 釷試劑Phospho-SLP-76 (Tyr145) Antibody5,7-二氯-8-羥基喹啉 鈦鐵試劑(AR)CEACAM1 (D1P4T) Rabbit mAb1,6-己二二縮水甘油 鈦鐵試劑(95%)PD-L1 (E1L3N®) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)吩噻-10 四溴酚酞乙酯鹽SYVN1 (D3O2A) Rabbit mAb1-溴-甲氧基-5-甲 金蓮橙OChloroquine對氯甲酸 四羥基-對-醌二水合物SB431542氯-甲酸 對二甲酚藍Dexamethasone氟酞酐
大腸彎曲桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒催素(PRL)ELISA試劑盒IFN Gamma (human) 干擾素-γ抗體（）100 ul 催產素受體(OXTR)ELISA試劑盒IFN gamma (mouse, rat) 干擾素-γ抗體（，）100 ul 催產素(OT)ELISA試劑盒IFNGR1/CD119 干擾素-gamma受體1抗體100 ul 促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA試劑盒IFNGR2 干擾素-gamma受體2抗體100 ul 促胰液素/分泌素受體(SR)ELISA試劑盒IGC 非洲爪蟾IGC抗體100 ul 促性腺激素釋放激素(GnRH)ELISA試劑盒IGF1R/CD221 胰島素樣生長因子I受體抗體100 ul 促酰化蛋白(ASP)ELISA試劑盒phospho-IGF1 Receptor (Tyr1161) 酸化胰島素樣生長因子1受體抗體100 ul 促胃液素受體(GsaR)ELISA試劑盒IGF1R/CD221 胰島素樣生長因子1受體抗體100 ul 促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒IGFBP1 胰島素樣生長因子結合蛋白-1抗體100 ul |
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