熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實(shí)用新型技術(shù)公開了一種實(shí)時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠(yuǎn)離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實(shí)用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。 產(chǎn)品名稱 | 不明血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Schistosoma incognitum | 貨號 | YSP97180 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
檸檬素(Citrin)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 馬克斯克魯維酵母 1g 溶質(zhì)載體家族26成員4(SLC26A4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 三骨菇 5g Prestin蛋白(PRES)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 雜色曲霉 25g 腎膠原凝集素1(CLK1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 中華芽孢桿菌 5g Gasdermin D蛋白(GSDMD)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 枯草芽孢桿菌 10g Gasdermin B蛋白(GSDMB)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 山楂生葉點(diǎn)霉 50g Gasdermin A蛋白(GSDMA)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 巴氏醋桿菌 1g Tafazzin蛋白(TAZ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 產(chǎn)氨短桿菌 25g 卷曲同源物1(FZD1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 葡紫紅菇 5g 卷曲同源物2(FZD2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 紫紅曲霉 25g 卷曲同源物3(FZD3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 凍土毛霉原變型 5g 卷曲同源物7(FZD7)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 三隔鐮刀菌 1g 卷曲同源物5(FZD5)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 芽孢桿菌屬 25g B-細(xì)胞淋巴瘤因子9(Bcl9)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 釀酒酵母 5g B-細(xì)胞淋巴瘤因子6(Bcl6)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 雙孢菇 100g B-細(xì)胞淋巴瘤因子8(Bcl8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 異常克漢姆酵母 25g 二氫嘧啶酶(DPYS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 97% 大腸埃希菌 5g SHC-轉(zhuǎn)化蛋白3(SHC3)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法) 98% 球孢白僵菌 100g
不明血吸蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒EFHA1蛋白抗體TRAF3/CD40bp (CD40 binding proin) 腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗原1 Kit 酸化轉(zhuǎn)錄因子E2F-1抗體TRAF6 (TNF receptor-associad factor 6) 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6抗原1 Kit EFHC1蛋白抗體TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-relad apoptosis-inducing ligand) 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體/凋亡素2配體抗原1 Kit EFHC2蛋白抗體TRBF1 (omeric repeat binding factor 1) 端粒體復(fù)制結(jié)合因子1抗原500 ul EFHD1蛋白抗體TRIM32(triparti motif proin 32) TRIM32抗原1 Kit 突觸結(jié)合蛋白2抗體Trop-2/Tpm2 peptide 原肌球蛋白抗原1 Kit 核苷酸焦酸酶2抗體TSARG4(stis and spermatogenesis relad gene 4) 生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因4抗原1 Kit 長鏈脂酰輔酶A水化酶抗體TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor) 惡性腫瘤特異性生長因子抗原1 Kit 神經(jīng)元，肌肉特異性化酶抗體CIDEB peptide CIDEB抗原1 Kit |
點(diǎn)擊放大