利什曼原蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒

樣品RNA的抽提：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。

熒光定量PCR試劑盒技術：
本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。
5-硝基吲哚(>98.0%(GC))4,8-二喹啉

甲基-硝基-吡啶 N-氧化物(>97.0%(T))4,8-二羥基喹啉

2-甲基-(>99.0%(GC))2-酰基-5-硝基吡啶

(S)-(-)-N-(5-硝基-2-吡啶基)脯氨(>99.0%(T))3,4,5,6-四-2-氨基吡啶

(S)-N-(5-硝基-2-吡啶基)基氨(>98.0%(T))3,4,5-三吡啶-2-甲酸

(S)-(-)-N-(5-硝基-2-吡啶基)氨(>98.0%(T))3,4,5-三-2-*基吡啶

鋁酞菁(>98.0%(T))3,4,5-三-6-羥基吡啶-2-羧酸

酞菁鐵(II)(升華提純)(>98.0%(T))3,5,6-三吡啶-2-甲酸

酞菁(>93.0%(N))3,6-二氟吡啶-2-甲酸

顏料藍15,酞菁藍B3,6-二氟吡啶-2-基

顏料綠 73,6-二2-吡啶甲酰

酞菁鉛(II)(>95.0%(T))3,6-DICHLOROPICOLINONITRILE

酞菁鋅(>95.0%(T))氨基-5-甲氧基吡啶

酞菁鐵(II)(>95.0%(T))氟-6-羥基-2-吡啶甲酸

酞菁鈷(II)(>90.0%(T))甲氧基-嘧啶羧基 酸

酞菁二鈉甲氧基喹啉

二酞菁錫(IV)-5-甲氧基吡啶

酞菁鎂(II)(S)-1-基-1,2,3,四氫異喹啉
利什曼原蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒卷曲螺旋結構域蛋白28B抗體MARCKS /FITC  熒光素標記丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體IgG100 ul

腫瘤/抗原74抗體MAP1A/Mtap1a /FITC  熒光素標記微管相關蛋白1A抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白38抗體MAP1LC3A/FITC  熒光素標記自噬微管相關蛋白輕鏈3抗體IgG100 ul

7號染色體開放閱讀框72抗體MAP-2/FITC  熒光素標記微管相關蛋白2抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白42抗體Phospho-MAP2 (Ser136) /FITC  熒光素標記酸化微管相關蛋白2抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白47抗體Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) /FITC  熒光素標記酸化微管相關蛋白2抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白43抗體ERK1/MAPK3/FITC  熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶3抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白46抗體MAPK4/FITC  熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶4抗體IgG100 ul

卷曲螺旋結構域蛋白63抗體Phospho-MARCKS (Ser152/156) /FITC  熒光素標記酸化丙氨酸蛋白激酶C底物Marcks抗體IgG100 ul