特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！ 產品名稱 | 生孢梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Clostridium sporogenes | 貨號 | YSP96568 |
熒光染料的優點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
 ?
熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比，因此，根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
 ?
熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段， PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
2,二甲酚(標準品)Phospho-PLCγ1 (Tyr783) AntibodyBOC-L-異亮氨酸 2,5-二甲酚標準溶液(分析標準品,>99.8%)Phospho-PLCγ1 (Tyr783) Antibody氧化釹 2,6-二叔丁基對甲酚(BHT)(分析標準品,>99.7%(GC))Phospho-PLCγ1 (Tyr783) Antibody氧化鎳 4,4'-二氨基二(ODA)(標準品)PLCγ1 Antibody釓雙銨 鄰二甲酸二癸酯(分析標準品,用于環境分析)MEP50 Antibody2-羥基吡啶-N-氧化物 2，二氯甲(標準品)SET7/SET9 (C24B1) Rabbit mAb溴乙酰乙酸乙酯 二十二烷(分析標準品,≥99.5%(GC))Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb沸石 二溴(分析標準品,99.5%)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb蒙脫石 1,2-二溴標準溶液(100 mg/l溶于甲)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb-2- 正癸烷(分析標準品,≥99.8%(GC))MEP50 (P328) Antibody酸三異丁酯 1,1-二氯乙烷(分析標準品,用于環境分析,≥99.7%(GC))PTMScan® Phospho-Ser/Thr-Pro Motif [p(S/T)P] KitL-纈氨酸叔丁酯鹽酸鹽 2,二硝標準溶液(1000μg/ml,溶劑：甲)CD3 (17A2) Rat mAb (PE Conjuga)3,4,5-三氟甲 2,二硝標準溶液(1.00mg/ml,基體：甲)Phospho-cPLA2 (Ser505) AntibodyN'-(*基)-L-天冬酰 2,二硝(分析標準品,用于環境分析)cPLA2 AntibodyN-Boc-N'-*基-L-谷氨酰 鄰二甲酸二異癸酯(標準品)NeuroD Antibody奧氮平 2，二(標準品)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)(2S,4R)-氨基吡咯烷-1,2-二甲酸 1-叔丁酯 2，2-二甲基丁烷(分析標準品,>99.5%(GC))Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb聚合氯化鋁 2,二甲基丁烷(分析標準品,≥99.9%(GC))Neurofilament-L (DA2) Mouse mAb5-硝基間二甲酸二甲酯
生孢梭菌探針法熒光PCR檢測試劑盒犬CC趨化因子受體2(CCR2)ELISA試劑盒Ntn1 軸突導向因子1抗體100 ul 犬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒Nur77/GFRP 孤兒核受體蛋白Nur77抗體100 ul 犬B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒Phospho-Nur77 (Ser351) 酸化孤兒核受體蛋白Nur77抗體100 ul 犬Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISA試劑盒NuMA 核有絲分裂器NuMA蛋白抗體100 ul 犬5羥色(5-HT)ELISA試劑盒Phospho-NuMA (Ser395) 酸化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體100 ul 犬Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒NUMB 膜相關蛋白Numb抗體100 ul 犬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)ELISA試劑盒Phospho-Numb (Ser276) 酸化膜相關蛋白Numb抗體20 ul 犬25羥基維生素D3(25 HVD3)ELISA試劑盒Nurr1 核受體相關因子-1抗體100 ul 犬2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA試劑盒OAS1 寡腺苷酸合成酶-1100 ul |
點擊放大