熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 雞傳染性貧血病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Chicken Infectious Anemia Virus(CIAV) | 貨號 | YSP96535 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
N,N-二(standard for GC,≥99.5%(GC))Itk (2F12) Mouse mAb溴-甲氧基 十二烷(標準品)Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody氧雜環丁- 四(≥99.5% (GC))Phospho-IRS-1 (Ser307) Antibody(S)-(-)-1,2,3,四氫-異喹啉甲酸芐酯對甲磺酸鹽 鉍標準溶液(100mg/L,基體: 5％HNO3)IRS-1 AntibodyN-芐基-吡咯烷 鈹標準溶液(10μg/ml,基體:2%HCl)IRS-1 Antibody1-芐基-吡咯烷酮 銅標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)CEA/CD66e (CB30) Mouse mAb2,二氯甲酰 銅標準溶液(100µg/mL,基體:1%HNO3)PathScan® Phospho-Btk (Tyr223) Sandwich ELISA kit3,二甲氧基酮 鈷標準溶液(1000μg/ml)BSCL2/Seipin (D3W8C) Rabbit mAb2-氯-5-硝基三氟甲 六價鉻標準溶液(1000μg/ml，溶劑：水)Phospho-IRS-1 (Ser302) Antibody溴-氟甲 鉺標準溶液(1000μg/ml,基體:1.0 mol/L HNO3)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody羥基甲酸乙酯 氟標準溶液(1.00μg/g,基體:0.1MH3BO3,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Ce-37mg/L)Phospho-IRS-1 (Ser1101) Antibody間三氟甲基肉桂酸 金標準溶液(100.0μg/g,基體: 0.5mol/L的HCl溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) Antibody2-肼基-5-溴吡啶 鉿標準溶液(1000μg/ml)p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)磺酰 銥標準溶液(1000μg/ml,基質：2.0mol/L鹽酸)PANK1 (D2W3N) Rabbit mAb4,5-二氟-2- 錳標準溶液(1000mg/L,溶劑：1%硝酸)Phospho-IRS-1 (Ser636/639) Antibody氯-氟三氟甲 鎂標準溶液(100µg/mL,基體:5%HCl)Phospho-IRS-1 (Ser789) Antibody6-羥基-2-萘甲 汞標準溶液(100µg/mL,基體: 3%HNO3)IRS-1 (59G8) Rabbit mAb乙炔環己 鎳標準溶液(500mg/L,溶劑：1%硝酸)Wnt3a Antibody氨基呋咱-羧酸
雞傳染性貧血病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒NADPH氧化酶1(/MOX1/)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Ser967) 酸化細胞凋亡信號調節激酶1抗體20 ul Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA試劑盒phospho-ASK1(Thr845) 酸化細胞凋亡信號調節激酶1抗體100 ul N1,N12-二乙酰基精 ELISA試劑盒Maspin 抑癌基因抗體100 ul N(ε)羧乙基賴氨酸(CEL)ELISA試劑盒MASP 甘露聚糖結合凝集素絲氨酸肽酶1抗體100 ul N -甲基- D -天冬氨酸抗體IgG(NMDA Antibody IgG)ELISA試劑盒MASP2 甘露聚糖結合凝集素絲氨酸肽酶2抗體100 ul MYC誘導核抗原(MINA)ELISA試劑盒Matriptase 蛋白裂解酶（一種新的癌基因）抗體100 ul MAX二聚化蛋白1(MXD1)ELISA試劑盒MBP 髓鞘性蛋白抗體100 ul MAP酸酶雙特異性酸酶1(DUSP-1)ELISA試劑盒CMV/HCMV PP65/HHV5 PP65 巨細胞病毒PP65/CMV低基質脂蛋白抗體100 ul L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒HCMV 巨細胞病毒20 ul |
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