熒光染料的優(yōu)點：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產(chǎn)物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優(yōu)化得以解決?？偟膩碚f，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優(yōu)點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段， PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
1-氮雜-15-冠-5-(>98.0%(T))3,二氟甲酸

1-氮雜-18-冠-6-(>98.0%(GC)(T))酸二芐酯

4'-氨基并-15-冠5-(>97.0%(GC)(T))芐基溴

1-氮雜-12-冠(>98.0%(T))2-氨基-5-溴-噻唑鹽

4'-酰并-15-冠-5-(>95.0%(GC))2,5-二溴對二甲酸

并-15-冠5-(>98.0%(GC))2-氨基-4,5-二氟甲酸

并-12-冠(>98.0%(GC))2-丁基-(羥基甲?；?-5-并呋喃

并-18-冠6-(>96.0%(GC))2-丁基-(甲氧基甲酰基)-5-并呋喃

4'-溴并-18-冠6-(>95.0%(GC))叔丁基(溴嘧啶-2-基)氨酸鹽

4'-溴并-15-冠5-(>93.0%(GC))N-BOC-5,6,7,8-四氫萘啶-2-酸

12-冠-(>95.0%(GC))N-Boc-順式-羥基-L-脯氨酸

15-冠-5-(>97.0%(GC))2-叔丁氧基羰氨甲酸

18-冠-6-(>98.0%(GC))R-1-1H-芐氧基吡咯烷鹽酸鹽

4'-羧基并-15-冠5-(>98.0%(GC)(T))(S)-5-溴甲基-2-吡咯烷酮

4'-羧基并-18-冠6-(>97.0%(GC)(T))(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環(huán)己二

2冠8-(>93.0%(GC))福多斯坦

15-冠-4[(2,二偶氮)酚](>98.0%(HPLC))1-金剛烷基二酸

18-冠-5[(2,二偶氮)酚]四氫吡喃-酸
鉤端螺旋體通用探針法熒光PCR檢測試劑盒貓眼綜合征染色體候選基因1抗體Mcl-1/FITC  熒光素標記髓樣細胞白血病-1抗體IgG100 ul

貓眼綜合征染色體候選基因6抗體Phospho-Mcl1 (Ser159/Thr163)/FITC  熒光素標記酸化髓樣細胞白血病-1抗體IgG20 ul

21號染色體開放閱讀框2抗體MCM2/FITC  熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白2抗體IgG100 ul

9號染色體開放閱讀框86抗體MCM3/FITC  熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白3抗體IgG20 ul

21號染色體開放閱讀框128抗體MCM5/CDC46/FITC  熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白5抗體IgG100 ul

6號染色體開放閱讀框62抗體MCM7/FITC  熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白7抗體IgG100 ul

CCZ1蛋白抗體MCP-1/FITC  熒光素標記巨噬細胞趨化蛋白-1抗體IgG100 ul

腦蛋白5抗體MCP-1/FITC  熒光素標記巨噬細胞趨化蛋白-1抗體()IgG100 ul

21號染色體開放閱讀框58抗體MCP-2/CCL8/FITC  熒光素標記單核細胞趨化蛋白2抗體()IgG1 mg
PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。