熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 耶氏肺孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Pneumocystis jirovecii | 貨號 | YSP97084 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
防御素α6(DEFα6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 棒曲霉 5g 纖維蛋白肽B(FPB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 香茅醇假單胞菌 1g Runt相關轉錄因子2(RUNX2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 放射形根瘤菌 5g 激肽釋放酶7(KLK7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 孤島鹽單胞菌 1g 70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 海南小短桿菌 5g 受體活性修飾蛋白2(RAMP2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 梾木生殼針孢 1g B類清道夫受體1(SCARB1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 植物乳桿菌植物亞種 5g ⅡA組脂酶A2(PLA2G2A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 枯草芽孢桿菌 1g 糖原合酶激酶3β(GSK3β)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 燼灰紅鏈霉菌果糖發酵亞種 250mg 核糖核酸酶L(RNASEL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 賴氨酸芽胞桿菌屬 5g 激活T-細胞核因子1(NFATC1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 根瘤菌 1g Osterix蛋白(OSX)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 木蹄層孔菌 100g C-型凝集素域家族2成員C(CLEC2C)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 黑木耳 25g 溶血脂酸受體3(LPAR3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 植物乳桿菌 1g 溶血脂酸受體3(LPAR3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 蟲類神食酵母 25g 胸腺旁腺素(PTMS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 桔橙小單孢菌 5g 脂解激活脂蛋白受體(LSR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 白毒鵝膏菌（不可訂購） 1g 肌球蛋白重鏈4(MYH4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 沃氏富鹽菌 25g
耶氏肺孢子蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒半胱氨酸蛋白酶8抗體GIP (Gastric Inhibitory polypeptide) 胃泌素抑制肽（抗原）100 ul 半胱酸蛋白酶蛋白9-p10抗體ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Proin 2) 血管位蛋白樣2/血管生成素樣蛋白-2（多肽）1 Kit C型凝集素結構域家族5成員A抗體GLP-2(Glucagon-like peptide-2) 胰高血糖素樣肽-2（多肽抗原）100 ul 周期素依賴激酶1抗體GRP94 (gp96) 94kDa 糖調節蛋白（抗原）1 Kit 細胞衰老抑制基因抗體Annexin A 膜粘連蛋白 A抗原100 ul 環腺苷酸應答元件結合蛋白抗體G Proin(Guanine nucleotide-binding regulatory proin) G蛋白（鳥苷酸結合蛋白）（抗原）100 ug 酪蛋白激酶1γ1抗體GR (Glucocorticoid receptor) 糖皮質激素受體 多肽100 ul 21號染色體開放閱讀框88抗體Annexin II 膜粘連蛋白-2抗原100 ul 21號染色體開放閱讀框54抗體GSK-3 Beta(NT) (Glycogen Synthase Kinase-3 Beta) 糖原合酶激酶-3β（抗原）100 ul |
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