探針法熒光PCR檢測試劑盒的優勢和測量原理

　　探針法熒光PCR檢測試劑盒具有顯著的優勢，可以實現基因表達的精確定量。特異性好，大大降低了檢測的假陽性，靈敏度高，采用靈敏的熒光檢測系統對熒光信號進行實時監控，操作簡單，無PCR產物污染。省去了最麻煩的基因序列查詢、引物探針設計、PCR擴增條件優化等大量費時、費力、費錢的繁瑣工作。探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。

　　探針法熒光PCR檢測試劑盒的原理在于PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收。正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比，因此，根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。