在組織培養過程中應嚴格注意以下幾點無菌操作環節，才能嚴格控制污染的發生。

一　組培材料的無菌化組織培養中外植體材料的初代培養無菌化體系的建立是組織培養工作順利進行的關鍵，要獲得無菌培養材料，可采取以下幾個程序。

1．外植體材料的預培養。若選用植物的莖塵、莖段或葉片作外植體時，可于枝條未萌發或未抽枝前采回來進行預培養，即在污染較少的室內或無菌條件下，將枝條用水沖洗后插入無糖營養液中，使其發枝、抽芽以備用。

2．接種前表面殺菌消毒。外植體表面用5％的次氨酸鈉或0.1％～O.2％的升汞溶液處理，處理時間視植物種類、外植體部位而定。對耐受力強的植物用升汞處理較好，lOmin內即可有效殺死附著在植物體表的細菌，但要注意*除去升汞的殘留，需用無菌水沖洗至少5到7次或更多。用5％～1O％的次氯酸鈉處理時，不留殘毒，效果也好，是常用的表面殺菌劑。也可以對外植體材料在殺菌前進行藥液浸泡，以加強滅菌效果。另外對于較為名貴的外植體材料一次很難清除污染的在培養lOd～20d中可用適宜的殺菌劑進行二次處理。

3．培養基中添加抗生素及殺菌藥物。對材料內部所帶的細菌和霉菌等雜質，可以在培養基中添加不同濃度的抗生素或殺菌劑減輕或防止污染的出現。（如：青霉素、鏈毒素、甲基托布津、多菌靈等）。

二　器具、器材及培養基的滅菌定期清洗接種用具、培養瓶、培養皿等，對于長久未用的接種用具及培養瓶等要用強酸、強堿消毒，清潔劑擦洗，必要時進行高溫滅菌。接種器械接種前必須進行嚴格的高溫滅菌。及時定期檢查母液及未接種的空白培養基，看是否有污染發生。注意母液要存放與冰箱中以免出現芽孢桿菌污染。芽孢桿菌是一種耐熱力很強，高溫很難殺死的菌類，一般存在于培養瓶壁和各種母液中，確保母液不被污染至關重要。培養基滅菌時一定注意不能堆放過滿，以免阻礙蒸汽流通和熱交換，造成物體內部殺菌不*，另外，待鍋內壓力升到0．5kg／cm2時打開放氣閥，將鍋內冷氣*排放干凈，然后再關閉放氣閥進行滅菌，在穩定壓力1．1kg／cm2，溫度120℃下持續滅菌15min～2Omin。培養瓶的棉塞要大小適中，瓶口要包扎嚴緊，防止病菌孢子從口而入。

三　無菌接種操作的技術環節保持無菌

1．確保接種室內清潔無菌。定期用70％的酒精噴霧消毒，用消毒水擦試地面、工作臺等，定期用甲醛加少量錳酸鉀熏蒸進行空間滅菌。每次接種前用紫光燈照射接種室、緩沖間及超凈臺20min，對紫光燈不能照到的死角要用流動紫光燈進行殺菌。關掉紫光燈后，應提前開啟超凈臺通風機lOmin～l5min。另外要定期檢查，清洗超凈臺的濾布。

2．確保接種人員在接種前不帶菌。操作人員要勤梳洗勤剪指甲，接種前先用肥皂洗手，并用0．1％的新潔爾滅溶液洗手3min～5min，在緩沖間穿帶己消毒后的衣、帽、鞋并戴上口罩，方可進入操作室。接種時避免說話、咳嗽。

3．接種時要保持接種臺整潔。雙手用75％的酒精擦洗方可開始接種工作，臺面放接種時*的器械，不要堆放過多物品，造成空氣不暢，使操作間得不到*凈化。

4．嚴把接種操作無污染關。初代接種時除嚴格按規程操作外，接種時培養基瓶口要轉動在火焰上燒烤，繼代轉接時，對選用的擴繁材料在進接種室前，要用75％的酒精進行外部消毒，打開瓶口后應傾斜向著火焰，動作要輕，幅度應適中，每次接種后器械需在95％的酒精中浸泡，然后在火焰上灼燒滅菌。接種期間要不斷用70％的酒精擦手及工作臺。

5．確保接種器械在接種過程中無菌。整個接種過程中要多次用75％的酒精擦洗滅菌，避免手觸碰培養物和器械伸入培養瓶內的部分。

6．做好接種后清潔預消毒。每次接種完后應*清潔接種室，并用0．5％的新潔爾滅溶液擦洗超凈臺及架擱等。

四　培養室內污染的控制 培養室是培養物生長的外部環境，除保持生長物體適宜的光、溫、濕外，組培室的清潔、衛生對于防止污染雜物生長是不可忽視的問題。因此對組培室要定期用75％的酒精噴霧降塵處理，并用0．5％的新潔爾滅溶液洗培養架、窗戶和地板。同時，及時清除組培室中的污染菌源和污染苗，并集中進行高溫滅菌，另外，若進行長期大量培養，則有必要定期對培養室進行熏蒸消毒，其甲醛與高錳酸鉀為2：1。

總而言之，控制或降低污染率是植物組織培養的關鍵技術之一，同時也是組織培養工作效率高低的重要指標之一。從組織培養的全過程來看，每一環節都可能出現污染，為了實現低污染率在組織培養中除了加強無菌意識，提高無菌操作各環節的技術規程外，還要注重無菌操作訓練，提高操作水平，同時在培養基中針對性的加入抑菌劑、抗菌素。