在繼續探討MKN-45細胞，這一人低分化胃癌細胞系的操作步驟時，我們不得不強調其培養環境的精細調控對于細胞生長與實驗結果的至關重要性。首先，確保培養基的配方精確無誤，通常MKN-45細胞使用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培養基，這有助于提供細胞生長所需的營養成分和生長因子。
接下來，細胞的傳代操作需謹慎進行。在無菌條件下，移除舊培養基，用預溫的PBS輕輕洗滌細胞一至兩次，以去除殘留的培養基和死細胞。隨后，加入適量含EDTA的進行消化，消化時間需根據細胞貼壁情況靈活調整，避免過度消化導致細胞損傷。待細胞邊緣開始變圓，輕輕拍打培養瓶使細胞脫落，加入適量新鮮培養基終止消化，并通過移液管輕柔吹打形成單細胞懸液。
在細胞計數后，按照適當的比例將細胞懸液接種到新的培養瓶中，注意控制細胞密度，避免過密導致生長抑制或過疏影響細胞間的相互作用。接種后，輕輕搖晃培養瓶使細胞均勻分布，并置于37°C、含5% CO?的恒溫培養箱中繼續培養。
此外，對于MKN-45細胞系的長期保存，可采用液氮凍存法。在細胞生長狀態良好時，進行凍存前處理，包括消化、離心收集細胞，并使用含有DMSO的凍存液重懸細胞。隨后，將細胞懸液分裝至凍存管中，按照梯度降溫的方式逐步放入4°C、-20°C、-80°C冰箱，最終轉移至液氮罐中長期保存。
通過上述細致的操作步驟，我們可以有效維持MKN-45細胞的活性與穩定性，為后續的科學研究提供可靠的實驗材料。
